解析PCR实验室污染来源及避免PCR实验室核酸污染的方案介绍

PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染，PCR实验室在实际工作中，常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。

PCR实验室的污染来源

1、样本间交叉污染：

收集样本的容器被污染或样本密封不严外溢；不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖；移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌；不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散，相互交叉污染。

2、实验试剂污染：

主要是在 PCR 组分试剂加样过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。 加样过程中，因为 PCR 试剂对温度十分敏感，需要通过冰浴使得 PCR 试剂和 PCR 板/管处于 0℃，但这个过程也是充满了污染的风险的。

3、扩增产物污染：

大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖，这是 PCR 反应中最主要最常见的污染问题。因为 PCR 产物拷贝量大，远远高于 PCR 检测数个拷贝的极限，所以极微量的 PCR 产物污染，就可形成假阳性。

4、克隆质粒污染：

作为阳性质控品的克隆质粒外溢。

要避免污染，首先应是预防，工作区域的严格划分，各个实验区域要有明显的标记(如醒目的门牌或不同的地面颜色等)，以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。实验室分为内廊、缓冲区、污染区，检验人员在缓冲区穿上防护服等装备，全副武装后分别进入到试剂准备区，标本制备区，扩增产物分析区。检验人员不可以将任何物品带进实验区。

检验人员在试剂准备区准备试剂，这里是实验的开始。试剂准备完成后，通过传递窗传送到标本制备区，在这里检验人员将标本和试剂混合好后，再通过传递窗传送到扩增产物分析区。在这个区域，检验人员将得到最终的核酸检测结果。

合理的系统设置，合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统;严格的气流压力控制，保证不同的实验区内不同的压力要求。

规范的操作，临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训，在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。清洁工作及时、正确。实验工作结束后，必须立即对本区进行清洁。

严格的管理:严格控制进出实验室的人员。在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服(如不同颜色)，当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域;尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧等。

PCR实验室如何预防核酸污染？

核酸实验室归根结底，污染还是重在预防。应遵循“预防第一、清除第二”的原则

那实验室一旦发生核酸气溶胶污染，又应该如何解决呢？

目前实验室中出现核酸气溶胶污染，处理的常规方法有：酒精擦拭、紫外线照射、高压变性。值得注意的是，要祛除DNA污染而不是仅仅灭菌的话，常规紫外线照射建议应延长至2小时，即使这样，紫外照射对去除小片段（200bp以下）的DNA污染效果仍然不佳。

核酸清除剂是目前市面上商品化使用的专门清除核酸污染的试剂，针对性强、效果好且毒性小。核酸清除剂是通过产生活性氧自由基，达到对核酸片段氧化降解目的。

润联提出的 Bio-In-hand 核酸污染去除仪及Novocide核酸去除剂共同治理方案，产生1+1＞2的效果。该方案能够快速显著的降低核酸污染⽚段，降解率高达99.99%，是⽬前能耗最少、雾化颗粒最均匀、扩散性最好的核酸清除方案。

比林科汉核酸污染解决方案的特点

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◆能快速有效氧化DNA、RNA污染源及核酸酶等分子物质；

◆防止外源DNA的干扰；

◆解决环境空气中的污染源同时，还能迅速处理桌面、PCR仪、离心机、移液器、试管架、离心管架、电泳槽等实验器材区域；

◆产品均具备CE,ISO等众多国内外权威资质；

◆适用于疾病控制中心、微生物实验室、动物房实验室、PCR实验室、分子实验室、P3及P4等实验室。

自新冠疫情后，润联针对实验室核酸污染，研发出小型便携智能且干雾效果极佳的核酸污染清除产品，同时，引进了源自欧盟的诺沃赛德核酸清除剂，最终推出的核酸污染解决方案已在全国几十家行业龙头单位及企业进行试行，其中包括疾控中心、体外诊断试剂企业、市级医院检验科等，取得了老师们的一致认可。

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实践证明，对于核酸检测实验室，核酸污染防大于治，一次污染事故造成的损失远大于防治污染的投入，只有严格规范操作，剔除潜在风险，杜绝污染隐患，才能保证实验室的长期稳定运行。方案详询润联张工18938962967